本文编自中华人民共和国卫生部与中国国家标准化管理委员会联合发布的《中华人民共和国国家标准》，名优酒研究中心真诚推荐。

前  言

  本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。
  本标准负责起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。
  本标准参加起草单位：山东省疾病预防控制中心、吉林省疾病预防控制中心。
  本标准主要起草人：杨大进、蒋定国、王竹天、李蔚、刘思洁。
  本标准为首次发布。

一、范围
  本标准规定了食品中阿斯巴甜的测定方法。
  本标准适用于碳酸饮料、乳饮料、浓缩果汁和固体饮料中阿斯巴甜的测定。
  当称样量为5g、定容体积为25ml、进样20μL时，方法的检出限为0.002g/kg。定量限为0.006g/kg，方法的线性范围为25μg/mL-500μg/mL.

二、原理
  根据阿斯巴甜易溶于水和乙醇等溶剂的特点，固体饮料中阿斯巴甜用蒸馏水在超声波振荡下提取，提取液用水定容；碳酸饮料类试样除二氧化碳后用水定容；乳饮料试样中阿斯巴甜用乙醇沉淀蛋白，上清液用乙醇+水（2+1）定容，提取液在液相色谱ODS C18反相柱上进行分离，在波长208nm出检测，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

三、试剂
  3.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
  3.2 乙醇（CH3CH2OH）：优级纯。
  3.3 阿斯巴甜标准品：纯度≥99%。
  3.4 水（H2O）：为实验室一级用水，电导率（25℃）为0.01mS/m。
  3.5 pH4.3的水：用乙酸调节水pH值为4.3。
  3.6 阿斯巴甜标准储备液（1.00mg/mL）：称取0.1g阿斯巴甜标准品（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用pH4.3的水溶解并定容至刻度，置于冰箱保存，有效期为三个月。
  3.7阿斯巴甜标准使用溶液系列的配制，将阿斯巴甜标准储备液用pH4.3的水逐级稀释为500μg/mL、250μg/mL、1250μg/mL、50.0μg/mL、25.0μg/mL的标准使用溶液系列。置于冰箱保存，有效期为两个月。

四、仪器
  4.1 液相色谱仪：配有二级管阵列检测器。
  4.2 超声波振荡器。
  4.3 离心机：4000r/min。

五、分析步骤
  5.1 试样的处理
  5.1.1  碳酸饮料类
  称取约10g试祥（称样量精确到0.001g），50℃微温除去二氧化碳，用水定容到25 mL～50mL，4000r/min离心5 min，上清液经0.45μm水系滤膜过滤，备用。

  5.1.2乳饮料类
  称取约5g试样（称样量精确到0.001g），于50mL离心管，加入10mL乙醇，盖上盖子，轻轻上下颠倒数次（不能振摇），静置1 min，4 000 r／min离心5 min，上清液滤入25 mL容量瓶，沉淀用5 mL乙醇+水(2+1)洗涤，离心后合并上清液，用乙醇+水(2+1)定容至刻度，经0.45μm有机系滤膜过滤，备用。

  5.1.3  浓缩果汁类
  称取0.5g～2g试样（精确到0.001g），用水定容到25mL或50mL，4000r／min离心5min，上清液经0.45μm水系滤膜过滤，备用。

  5.1.4  固体饮料
  称取0.2g～lg试样（精确到0.001g），加水后超声波振荡提取20min，并定容到25mL或50mL，4000r／min离心5min，上清液经0.45μm水系滤膜过滤，备用。

  5.2测定
  5.2.1  液相色谱参考条件
  色谱柱：ODS C18柱，4.6mm×250mm，5μm。
  流动相：甲醇+水(39+61)。
  流速：0.8 mL／min。
  进样量：20μL。
  柱温：25℃。
  检测器：二极管阵列检测器。
  检测波长：208 nm。

  5.2.2  校正曲线绘制
  取阿斯巴甜标准溶液系列，在上述色谱条件下进行HPLC测定，绘制阿斯巴甜浓度一峰面积（峰高）的标准曲线或求出直线回归方程。

  5.2.3包谱分析
  在上述的液相色谱条件下，分别将标准溶液和试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。

六、结果计算
  按标准曲线外标法计算试样中阿斯巴甜的含量，计算公式见式(1)：

    式中：
    X——试样中阿斯巴甜的含量，单位为克每千克( g/kg)；
    c——由标准曲线计算出进样液中阿斯巴甜的浓度，单位为微克每毫升(μg／mL)；
    V——试样的最后定容体积，单位为毫升(mL)；
    m——试样的质量，单位为克(g)；
   1000-由)μg/g换算成g/kg的换算因子。

七、精密度
  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。

八、色谱图
    阿斯巴甜标准色谱图见图1。