国家标准|食品中纽甜的测定方法,高效液相色谱法(GB/T 23378-2009)

来源: | 作者:名优酒研究中心 | 发布时间: 1967天前 | 7003 次浏览 | 分享到:

本文编自中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局与中国国家标准化管理委员会联合发布的《中华人民共和国国家标准》，名优酒研究中心真诚推荐。

前言

  本标准的附录A为资料性附录。
  本标准由全国食品安全应急标准化工作组提出并归口。
  本标准主要起草单位：国家食品质量监督检验中心（上海）、上海市质量监督检验技术研究院。
  本标准主要起草人：曹程明、印杰、李俊、葛宇。

一、范围
  本标准规定了用高效液相色谱法测定食品中纽甜含量的方法。
  本标准适用于食品中纽甜的测定。

二、规范性引用文件
  下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
  GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008，IS0 3696:1987，MOD)

三、原理
  试样经缓冲液提取，固相萃取柱净化后，用高效液相色谱检测，外标法定量。

四、试剂与材料
  除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
  4.1 乙腈：色谱纯。
  4.2 辛烷磺酸钠：色谱纯。
  4.3 磷酸。
  4.4 甲酸：色谱纯。
  4.5 甲醇：色谱纯。
  4.6 纽甜标准品：纯度≥99.O%。
  4.7 混合提取液：分别吸取0.8 mL甲酸和2.5 mL三乙胺，加水定容至1000 mL，pH值约4.5。
  4.8 离子对试剂缓冲液：称取2.00g辛烷磺酸钠，用适量水溶解，加入1.Oml磷酸，加水定容至1000 mL。
  4.9 C18固相萃取柱：6 mL，500 mg，SupelcleanTM LC-18，或相当者，使用前依次用5 mL甲醇、10 mL水活化。
  4.10 标准储备液：准确称取0.100 0 g纽甜标准品，加混合提取液溶解定容至100 mL，此溶液纽甜含量为1.00 mg／mL。
  4.11 标准使用液：吸取纽甜标准储备液1.0 mL于100 mL容量瓶中，加混合提取液定容至刻度，此溶液纽甜含量为10.0μg／mL。
  4.12 微孔滤膜：0. 45 μm，有机相。

五、仪器和设备
  5.1 高效液相色谱( HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
  5.2 超声波清洗仪。
  5.3 涡旋混合器。
  5.4 分析天平：感量为0.0001g和0.01g。
  5.5 固相萃取装置。
  5.6 氮吹仪。
  5.7 离心机：转速不低于4 000 r／min。

六、样品处理
  6.1 样品提取
  6.1.1 固态样品
  称取10g（精确到0.01g）均匀试样于50mL具塞塑料离心管中，加入30mL混合提取液(4.7)，涡旋振荡10 min，超声30 min后，用混合提取液定容至刻度，若溶液混浊，以不低于4 000 r／min离心10 min后，过滤待用。
  6.1.2 液态样品
  准确量取10.O mL试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入30 mL混合提取液(4.7)，振荡混匀。超声15 min后，用混合提取液定容至刻度，若溶液混浊，以不低于4 000 r／min离心10 min后，过滤待用。
  注：含气样品如碳酸饮料、汽水等先微温，搅拌去除试样中的二氧化碳或超声脱气后，再准确量取试样。
  6.2 样品净化
吸取10.O mL的过滤液以1 mL/min～2 mL/min的流速通过固相萃取柱(4.9)，待滤液完全流出后，用5 mL的混合提取液以1 mL／min～2 mL／min的流速淋洗萃取柱，弃去全部流出液，用5 mL甲醇以1 mL／min的流速洗脱，洗脱液在40c水浴中用氮吹仪浓缩定容至2.0 mL，经0.45 tLm滤膜过滤后作为待测液供HPLC分析。

七、高效液相色谱测定
  7.1 HPLC参考条件
a) 色谱柱：ZORBAX SB C18，250 mmX4.6 mm(内径)，5μm或相当型号色谱柱。
b) 柱温：30℃。
c) 检测波长：218 nm。
d) 流动相：溶剂A乙腈十溶剂B离子对试剂缓冲液(4.8)。
e) 流速：1.0 mL／min。
f) 进样量：50.0 VL。
g) 梯度洗脱条件见表l。

表1 参考流动相配比

7.2 测定
分别取纽甜标准工作液和待测液10.OμL注入高效液相色谱仪进行测定。

7.3 结果计算
样品中纽甜的含量(X)以毫克每千克(mg/kg)或毫克每升(mg/L)表示，按式(1)计算：

  式中：
  X——样品中纽甜含量，单位为毫克每千克或毫克每升(mg/kg或mg/L)；
  A2——样品峰面积；
  A1——标样峰面积；
  c——纽甜标样浓度，单位为微克每毫升( μg/mL)；
  K——样品稀释倍数；
  V——样品洗脱液浓缩定容体积，单位为毫升(mL)；
  m——样品质量，单位为克(g)。
  计算结果保留两位有效数字。

八、方法定量检出限
  本标准的方法定量检出限为：0.2 mg/kg。

九、允许差
  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。